ALDEFLUOR Activation

1. dry ALDEFLUOR Reagent vial에 25ul DMSO 첨가 후 잘 섞고 1분 대기

* 오랜지-레드 가루 색이 밝은 노랑-초록 색으로 변한다.

2. 25ul 2N HCl 넣고 섞는다. 그 후 15분간 incubate at RT

* DMSO 전에 HCl을 넣으면 불활성됨.

3. 360ul ALDEFLUOR Assay Buffer mix

* 희미해질 수도 있다.

4. 활성화된 ALDEFLUOR Reagent를 2 ~ 8℃에 보관

5. 남은 ALDEFLUOR Reagent는 aliquot 하여 -20℃ 저장

 

Cell sample preparation

1. fresh or frozen cell sample 준비

2. cell count

3. 1 x 10^6 cell/ml with the ALDEFLUOR Assay buffer.

 

ALDEFLUOR ASSAY

1. labeling <test> <contol>

2. <control> 5ul DEAB(ALDH inhibitor) 첨가

* DEAB가 95%의 ethanol로 되어있으므로 바로 뚜껑을 닫는다

3. <test> sample ml 당 5ul의 activated ALDEFLUOR Reagent 첨가

mix 후 바로 0.5ml을 <control>로 옮긴다.

* ALDH enzymatic reaction은 즉각 일어나기 때문에

4. incubate 30 ~ 60min at 37℃

5. centriguge for 5min at 250 x g 후 supernatant 제거

0.5ml ALDEFLUOR Assay Buffer로 resuspend cell pellets 후 4℃ 나 아이스에 보관

 

Posted by 가우너

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