은염색법 (Silver Staining)

은염색법 (Silver Staining)

은 (silver nitrate)를 이용한 단백질 염색법은 민감도의 우수성 때문에 그 종류 또한 무수히 많다. 사용하는 방법에 따라서 시간적인 차이는 물론 background염색 민감도, 더욱이 염색되는 색상에 있어서 까지 많은 차이를 보이고 있어 연구자들는 자신의 환경에 맞는 은염색법을 선택하여 사용해야만 한다.

 

Rapid Staing 방법 (소요시간 70분)

 

용액준비하기

Fixer

40% MtOH/10% Acetic acid

Silver Stain Solution

1g/L Silver nitrate (ultrapure grade)

0.15ml/L Formaldehyde

Developer

30g Na2CO3

20ml 0.4M Na2S2O3

1.5ml/L Formaldehyde

 

1. 고정액에서 20분간 고정한다

2. 증류수로 5분씩 2회 세척한다

3. Siver staining solution을 30분간 처리한다

4. 증류수로 gel을 가볍게 앃어주고

5. Developer에서 원하는 강도가 나올 때까지 반응시킨다

6. 고정액으로 반응을 정지시킨다.

 

주의1: 모든 용액에서 formaldehyde는 사용직전에 첨가해야 하며 염색강도는 formaldehyde의 첨가량에 따라 달라지므로 실험자가 이를 자기에게 맞는 조건으로 조절해 줄 필요가 있다

주의2: 용기는 가능한 깨끗한 유리용기를 사용해야 하며 gel을 절대로 맨손으로 만져서는 안 된다.

주의 3: 짧은 시간간격으로 Fixing/washing을 반복해 주면 그만큼 강도가 증가된다.

주의 4: Developing시간이 길어지면 backgroud가 많이 나올 수 있다

 

원리 Silver staining의 원리는 DNA의 염기사이를 이어주고 있는 phosphate의 (-) charge에 (+)이온인 은이온(Ag)가 결합된 후에 Sodium carbonate에 의한 알칼리 조건에서 formaldehyde로 환원시켜주면, DNA에 결합되어 있던 은이온이 환원되면서 금속화가 되면서 불투명해져서 눈으로 보이게 되는 것. 즉, 은으로 코팅.

아미노산의 기능기에 결합하는 은 이온의 환원차를 이용한 것이다.