ALDEFLUOR Activation
1. dry ALDEFLUOR Reagent vial에 25ul DMSO 첨가 후 잘 섞고 1분 대기
* 오랜지-레드 가루 색이 밝은 노랑-초록 색으로 변한다.
2. 25ul 2N HCl 넣고 섞는다. 그 후 15분간 incubate at RT
* DMSO 전에 HCl을 넣으면 불활성됨.
3. 360ul ALDEFLUOR Assay Buffer mix
* 희미해질 수도 있다.
4. 활성화된 ALDEFLUOR Reagent를 2 ~ 8℃에 보관
5. 남은 ALDEFLUOR Reagent는 aliquot 하여 -20℃ 저장
Cell sample preparation
1. fresh or frozen cell sample 준비
2. cell count
3. 1 x 10^6 cell/ml with the ALDEFLUOR Assay buffer.
ALDEFLUOR ASSAY
1. labeling <test> <contol>
2. <control> 5ul DEAB(ALDH inhibitor) 첨가
* DEAB가 95%의 ethanol로 되어있으므로 바로 뚜껑을 닫는다
3. <test> sample ml 당 5ul의 activated ALDEFLUOR Reagent 첨가
mix 후 바로 0.5ml을 <control>로 옮긴다.
* ALDH enzymatic reaction은 즉각 일어나기 때문에
4. incubate 30 ~ 60min at 37℃
5. centriguge for 5min at 250 x g 후 supernatant 제거
0.5ml ALDEFLUOR Assay Buffer로 resuspend cell pellets 후 4℃ 나 아이스에 보관
