쥐 정자 수 및 형태 검사 실험

 

 

정자검사
1) 고환 당 정자두부 수 검사:

 먼저 중량을 측정한 좌측고환의 백막을 제거하고, 12 ml의 증류수가 들어있는 튜브에 넣은 다음 균질기로 충분히 균질화한 후, 초음파기를 이용하여 4～7℃에서 3분간 초음파 처리하였다. 균질액 한 방울을 취하여 혈구계산판(hemacytometer; Neubauer, Germany)에 고르게 퍼지도록 주입하고 충분히 안정이 되도록 5분 이상 방치한 후에 광학현미경을 이용하여 200배율로 관찰하여 고환 당 총 정자두부 수를 계산하였다.

 

2) 정자운동성 측정:

좌측부고환 미부를 분리하여 중량을 측정한 다음 2 ml의 정자배양액이 든 배양접시에 넣고 정자가 유리될 수 있도록 일부분을 절개하였다. 정자배양액은 5 mg/ml의 bovine serum albumin이 들어있고 pH 7.2로 조정된 Hanks' balanced salt solution (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO,USA)을 사용하였으며, 1회용 배양접시에 넣고 37℃의 배양기에서 5분간 배양하였다. 이 정자배양액을 한 방울 취하여 37℃로 유지된 홈이 파진 슬라이드 글라스에 놓고 커버글라스를 덮어서 현미경의 항온판(microwarm plate)에 놓은 다음 200배율로 검경하였으며, 각 개체 당 100마리의 정자에 대해서 운동성 유무
를 관찰하였다. 이 때 3초 동안 조금이라도 움직임이 있으면 운동성 정자로 판정하였다.

 

3) 부고환 미부 당 정자 수 측정:

정자운동성 검사가 끝난 좌측부고환 미부의 조직을 잘게 세절한 다음 10 ml의 생리식염수가 들어있는 튜브에 넣었다. 균질기를 이용하여 충분히 균질화한 후 균질액 한 방울을 취하여 정자두부 수 측정과 같은 방법으로 혈구계산판에서 정자 수를 계수하였다.

4) 정자형태 검사:

정자운동성 검사 시 취한 정자배양액의 일부를 사용하여 염색표본을 제작하였다. 슬라이드 글라스에서 1% eosin Y와 2:1로 잘 혼합한 다음 커버글라스를 덮어서 염색표본을 만든 후, 각 개체 당 200마리의 정자에 대해 형태학적 이상 유무를 관찰하였다.